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实 验 方 案

定量PCR(Polymerase Chain Reaction)技术

定量PCR(Polymerase Chain Reaction)技术有广义概念和狭义概念。广义概
念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准,通过对PCR终产物的分析或PCR过程
的监测,进行PCR起始模板量的定量。
广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型:
(1)外参法+终产物分析。所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器
内反应。这种类型没有对样本进行质控监测,易出现假阴假阳结果,没有监测扩

增效率,定量不准。

(2)内参法+终产物分析。所谓“内参法”是指样本与阳性参照在一个反应容器
内反应。这种类型对样本进行质控监测,排除假阴结果,但是定量不准。
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(3)外标法+过程监测。这种类型监测扩增效率,阳性样本定量准,但是无法排除假阴结果。
(4)内参法+过程监测。由于样本与阳性参照在一个容器内反应,用同样的Taq酶和反应参与物,存在竟争性抑制,起始模板量浓度
高的反应会抑制起始模板量浓度低的反应,所以定量不准。
(5)外标法+过程监测+内对照。这种类型监测扩增效率,阳性样本定量准,同时排除假阴结果。这种类型是应该提倡的。PCR过程
的监测有多种检测模式。
 
 
 
 
 
 
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